בקביעה הדיפרנציאלית של אנטרובקטריות וכמה ויבריות, תגובת Voges-Proskauer תופסת מקום מיוחד. הבדיקה מבוססת על יכולתם של חיידקים לתסיס גלוקוז ליצירת אצטואין.
מהות תהליך המחקר
במיקרוביולוגיה, תגובת Voges-Proskauer משמשת לעתים קרובות כדי להבדיל בתוך משפחת Yersinia של enterobacteria (כולל הפתוגנים של פסאודו-שחפת ו-Enterocolitis), Escherichia coli, ואירובים יוצרי נבגים. התוצאה מוצגת על ידי צביעת המדיום כאשר מוסיפים ריאגנטים מסוימים.
בדיקה זו שייכת לסדרת IMViC (ראשי תיבות של Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - קבוצה של מבחני זיהוי הכוללים הגדרות דיפרנציאליות:
- עם אינדול, מבוסס על פירוק טריפטופן לאינדול, בשימוש בנוכחות מגיב של Kovacs או Ehrlich;
- בשימושמתילרוט, או מתיל אדום, המזהה pH נתון כתוצאה ממטבוליזציה של גלוקוז;
- תגובות Voges-Proskauer לזיהוי אצטיל-מתיל-קרבינול;
- ניצול של ציטראט עם שינוי צבע כתוצאה מאלקליזציה של המדיום.
מהות התהליך היא הדמיה של נוכחותם של חיידקים מאובחנים עקב האינטראקציה של אצטואין שנוצר על ידם עם אשלג קאוסטית בנוכחות חמצן. אצטיל-מתיל-קרבינול מחומצן לדיאצטיל, היוצר תרכובת אדומה או ורודה בהירה. הגבר את רגישות הבדיקה על ידי החדרת אלפא-נפתול לפני הוספת אשלג קאוסטית.
הגדרת מבחן
הניסוח של תגובת Voges-Proskauer כולל טיפוח מקדים של מיקרואורגניזמים. תרבית טהורה נזרעת על מדיום האבחון הדיפרנציאלי של קלארק, שווריאציה שלו היא המרק של קלארק (ללא תוספת של אגר-אגר). משתמשים במדיום מוכן, או מוכנים באופן עצמאי. המרכיבים כוללים:
- 5g פפטון;
- 5g גלוקוז;
- 5g אשלגן פוספט דו-בסיסי;
- 1L תזקיק.
במהלך המחקר, התרבית מחוסנת בלולאה בקטריולוגית סטרילית לתוך תווך נוזלי. כמות - 5 מ ל במבחנה פלוס בקרה. הדגירה מתבצעת בטמפרטורה של 35-37 מעלות למשך יומיים. לאחר מכן, מחקר של תגובת Voges-Proskauer מתבצע בשלבים:
- 2, 5 מ"ל של תרבית מרק מועברים לצינור סטרילי.
- הוסף שש טיפות של אלפא-נפתול (תמיסת אלכוהול של 5%).
- הוסף 40%תמיסה של אשלגן קאוסטי בכמות של 0.1 מ"ל, או שתי טיפות.
- הערבול מתבצע על ידי ניעור עדין של המבחנה.
- הערך את התוצאה לאחר 15 דקות מתחילת הניסוי.
שיטת בדיקה חלופית היא דגירה של לילה, משך הזמן שלה מצטמצם ל-18 שעות או עד יום. בנוסף לשיטה זו, נעשה שימוש גם בבדיקה אקספרס: מכניסים תרבית בלולאה ל-2 מ ל של המדיום, מדגרים כארבע שעות, ואז מוסיפים ריאגנטים בכמות שווה של 2-3 טיפות, מערבבים התוצאה מוערכת לאחר עשר דקות.
הבקרה היא אחד מהגורמים הגורמים לדלקת ריאות Klebsiella pneumoniae - זן atcc 13883.
הערכת התוצאה
לאחר הזמן הנדרש לאחר הוספת הריאגנטים (מ-5 עד 15 דקות), יש להבחין בצבע אדום דובדבן עם תגובה חיובית בולטת, אדום וורוד - עם תגובה חיובית חלשה. שום שינוי לא נרשם כתוצאה שלילית.
עודף אשלג קאוסטית בתמיסה יכול לתת חיקוי של תגובה חיובית, מכתים בצבע נחושת. במקרה זה, יש לרשום את התגובה השלילית של המושבה הנבדקת. כמו כן, צביעת נחושת מופיעה במקרים בהם ההערכה ניתנת שעה לאחר הכנסת הריאגנטים.
בעת הערכת התוצאה, יש לקחת בחשבון שטיפוח ממושך של המיקרואורגניזמים הנחקרים (יותר משלושה ימים) מוביל להחמצה של המדיום, מה שעלול להוביל לתוצאה לא נכונה של המחקר. התגובה עשויה להיות חיובית קלה אושקר שלילי.
דרישות עבור ריאגנטים לבדיקה
ריאגנטים של Voges-Proskauer חייבים לעמוד בדרישות כגון ריכוז נכון, טוהר גבוה ויציבות, אשר מושגת באמצעות אחסון נאות.
ערכות בדיקה מוכנות לשימוש מכילות בדרך כלל ריאגנטים ל-100 שימושים או יותר ומגיעות בבקבוקוני פלסטיק או זכוכית כהה. האיכות מוסדרת על ידי התיעוד הרלוונטי.
