מגוון הזיהומים החיידקיים דורש זיהוי ברור של הפתוגן והגדרת המין שלו. כדי לקבוע את סוג המיקרואורגניזם, מיקרוביולוגים נעזרים בתכונותיו הטינקטוריות - הרגישות של החיידק לצביעה בצבעים שונים. שיטה זו מאפשרת לך לחקור את המורפולוגיה של הפתוגן. לתכונות הטינקטוריות של חיידקים חשיבות רבה למחקר מעשי ותיאורטי בתחום המיקרוביולוגיה.
מחקר מיקרוביאלי
בבקטריולוגיה, קיימות שיטות רבות לצביעה של מיקרואורגניזמים. כולם מבוססים על המאפיינים הטינקטוריים של חיידקים. צביעה מאפשרת לך לקבוע את הצורה, המבנה, הגודל, המיקום היחסי שלהם. זה מאפשר לפתור את הבעיות של שיטתיות של סוגי המיקרואורגניזמים של הביולוגיה הכללית ומיקרוביולוגיה השוואתית.
למה לצבוע אותם
חיידקים הם כמעטאורגניזמים שקופים, וללא שימוש בצביעה, הם נראים בצורה גרועה עבור מיקרוסקופיה קונבנציונלית. אתה יכול להשתמש בסוגים מיוחדים של מיקרוסקופיה (ניגודיות פאזה, שדה כהה) כדי לחקור אובייקטים, אבל הדרך הקלה ביותר היא לצבוע, ולאחר מכן החיידקים הופכים גלויים במיקרוסקופ אור רגיל.
הכנה לדוגמא
ללא קשר לטכניקת הצביעה בה משתמשים, ישנם כללים אחידים להכנת האובייקט הנבדק. השלבים הבאים הם חובה:
- מכשירים סטריליים עושים מריחה על שקופית זכוכית.
- הדגימה עוברת ייבוש. זה נעשה בטמפרטורת החדר או באמצעות ארונות ייבוש.
- בעקבותיו שלב הקיבוע - מיקרואורגניזמים מחוברים לזכוכית בעזרת תרכובות מיוחדות.
- צביעה נכונה - הדגימה מכוסה בצבע לפרק זמן קבוע ולאחר מכן היא נשטפת.
- ייבוש סופי - הדגימה מיובשת שוב.
הצבעים הנפוצים ביותר
הצבעים הנפוצים ביותר מבוססים על אנילין עם ערכי חומצה שונים (pH). רוב הצבעים הם אבקות המדוללות באלכוהול.
צבעים שבהם הקטיונים הם חומרי הצביעה נקראים בסיסיים (pH גדול מ-7). ניתן להשתמש בהם כדי לצבוע מיקרואורגניזמים בצבעים אדום (מגנטה, ספרנין), סגול (מתיל סגול, תיונין), כחול (כחול מתילן), ירוק (ירוק מלכיט), חום (כריסואידין) ושחור (אינדולין).
צבעים, שבהם חומרי הצביעה הם אניונים, נקראים חומציים (pH נמוך מ-7). הם יצבעו את המדגם באדום (אאוזין), צהוב (פיקרין) או שחור (ניגרוסין).
יש קבוצה של צבעים ניטרליים (לדוגמה, rhodamine B), שבהם גם קטיונים וגם אניונים פועלים כחומרי צבע.
תרבות מתה או חיה
שיטות הצביעה מחולקות לשתי קבוצות לפי צורת החיים של דגימת הבדיקה.
- צביעה חיונית (לכל החיים). שיטה זו של חקר המאפיינים של מיקרואורגניזמים משמשת בחקר רקמות חיות, המאפשרת לצפות בתהליכים החיוניים של חיידקים. עבור צביעה זו משתמשים בצבעים בעלי רעילות נמוכה ועוצמת חדירה גבוהה.
- צביעה פוסט-חיונית. זוהי צביעה של מיקרואורגניזמים מתים או מומתים. הודות למאפיינים הטינקטוריים של חיידקים, מיקרוביולוגים קובעים את המבנה שלהם. הצביעה הזו נמצאת בשימוש הנפוץ ביותר.
גראם חיובי וגרם שלילי
מאפיינים אלה של חיידקים ניתן למצוא בהוראות לתרופות שונות. שיטה זו של חקר המאפיינים הטינקטוריים של חיידקים מבוססת על שימוש בצבע סגול ג'נטיאן וקיבוע יוד. זוהי הטכניקה של הנס כריסטיאן גראם, רופא דני שהציע זאת ב-1884. כתוצאה מצביעה זו, החיידקים מחולקים לשתי קבוצות:
- גרם (+) - הופכים לכחול(סטפילוקוק וסטרפטוקוק).
- גרם (-) - כתם ורוד לאדום (אנטרובקטריה, סלמונלה, אי קולי).
תוצאות צביעה שונות נובעות מתכונות צבע שונות של קירות חיידקים. שיטת כתמי גראם היא עדיין העיקרית באבחון של כמה מחלות זיהומיות.
טכניקות צביעה אחרות
בואו נאפיין עוד כמה שיטות בשימוש נרחב בבקטריולוגיה.
- שיטת Ziehl-Nelson - קובעת את העמידות לחומצה של חיידקים. הוא מזהה את הגורמים הגורמים לשחפת ומיקובקטריוזיס.
- טכניקת רומנובסקי-גימסה - מכתים חיידקים אסידופיליים (חומצה אצטית וחומצה חלבית) באדום, ובזופילי (ספירושטים ופרוטוזואה) כחול.
- הטכניקה של מורוזוב - מכתים את החיידקים בחום והופכת את הדגל שלהם לגלוי.
ניתן לראות נבגים
צביעת הפוצ'ין של ציל מאפשרת לראות נבגי חיידקים. בעלי צבע ורוד לאחר צביעה, הם נראים בבירור על רקע חיידקים כחולים. שיטה זו היא גם כלי של בקטריולוגיה ויש לה חשיבות מעשית רבה.
